OBJETIVO
1. Realizar extensiones o frotis bacterianos a partir de muestras sólidas y líquidas.
2. Realizar una tinción simple de las bacterias y levaduras presentes en distintas muestras naturales.
3. Observar la morfología bacteriana y comenzar a distinguir los diferentes tipos de agrupaciones existentes .
4. Practicar con el microorganismo empelando el máximo aumento, aplicando correctamente el aceite de inmersión y regulando adecuadamente el condensador y el diafragma.
MATERIAL
Asa de platino, mechero Bunsen, portaobjetos,
muestras bacterianas de origen natural, colorantes para tinción ( cristal violeta, safranina, azul de metileno,etc), microscopio y aceite de inmersión.
PROCEDIMIENTO
1. Extensión:
- Colocar una gota de agua destilada en el porta.
- Con el asa de platino , estéril, transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota .
- Remover la mezcla con el asa hasta formar una suspensión homogénea y extenderla bien con el asa.
- Si el material de partida es un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar el paso1, basta con realizar directamente la extensión.
2. Desecación:
La preparación se deja secar, a temperatura ambiente o calentando muy suavemente.
3. Fijación :
Formas más habituales de fijación:
- Por calor: realizando 3 pases por la llama azul del mechero Bunsen y dejando enfriar, pues si le añadimos el colorante precipitaría por el calor.
- Por fijadores; pueden ser simples como el alcohol o mezclas fijadoras.
TINCIÓN SIMPLE O SENCILLA : BACTERIAS DEL YOGOURT
1. Sobre un portaobjetos desengrasado realizar la extensión o frotis, tomando una mínima porción de yogur, con una asa de siembra previamente flameada.
2. Secar al aire.
3. Fijar con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama del mechero.
4. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 min ( cristal violeta, safranina, azul de metileno, etc..)
5. Secar la preparación.
Observar con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
LEVADURAS
1. Con un asa de siembra , previamente flameada, se deposita una gota de agua estéril sobre un portaobjetos limpio y desengrasado.
2. Flamear de nuevo el asa.
3. Tomar una pequeña porción de levadura de cerveza, suspenderla y homogeneizarla en la gota de agua y realizar la extensión o frotis.
4. Secar al aire
5. Fijar con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama del mechero.
6. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 min ( cristal violeta, safranina, azul de metileno, etc..).
7. Secar la preparación.
8. Observar con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
1. Con un asa de siembra, previamente flameada, se deposita una gota de agua estéril sobre un portabjetos limpio y desengrasado.
2. Flamear de nuevo el asa.
3. Con un hisopo estéril tomar una pequeña porción de sarro dental suspenderlo y homogeneizarlo en la gota de agua y realizar la extensión o frotis.
4. Secar al aire.
5. Fijar con calor pasando, tres veces, el porta sobre la llama del mechero.
6. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos.
7. Secar la preparación.
8. Observar con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
